Dankon pro via vizito al Nature.com. La retumilversio, kiun vi uzas, havas limigitan subtenon por CSS. Por plej bonaj rezultoj, ni rekomendas uzi pli novan retumilon (aŭ malŝalti kongruecan reĝimon en Internet Explorer). Dume, por certigi daŭran subtenon, ni montros la retejon sen stiloj kaj JavaScript.
La establado de bestaj modeloj de modika ŝanĝo (MC) estas grava bazo por la studado de MC. Kvindek kvar Nov-Zelandaj blankaj kunikloj estis dividitaj en ŝajnoperacian grupon, muskolan implantadan grupon (ME-grupo) kaj nukleopulposa implantada grupo (NPE-grupo). En la NPE-grupo, la intervertebra disko estis eksponita per anterolaterala lumba kirurgia alproksimiĝo kaj pinglo estis uzata por trapiki la L5-vertebran korpon proksime de la finaĵplato. NP estis eltirita el la L1/2 intervertebra disko per injektilo kaj injektita en ĝin. Borado de truo en la subkondra osto. La kirurgiaj proceduroj kaj boradmetodoj en la muskolan implantadan grupo kaj la ŝajnoperacia grupo estis la samaj kiel tiuj en la NP-implantada grupo. En la ME-grupo, peco de muskolo estis metita en la truon, dum en la ŝajnoperacia grupo, nenio estis metita en la truon. Post la operacio, MRI-skanado kaj molekulbiologiaj testoj estis faritaj. La signalo en la NPE-grupo ŝanĝiĝis, sed ne estis evidenta signalŝanĝo en la ŝajnoperacia grupo kaj la ME-grupo. Histologia observado montris, ke nenormala hista proliferado estis observita ĉe la implantada loko, kaj la esprimo de IL-4, IL-17 kaj IFN-γ estis pliigita en la NPE-grupo. Implantado de NP en la subkondran oston povas formi bestan modelon de MC.
Modikaj ŝanĝoj (MC) estas lezoj de la vertebraj finaĵplatoj kaj apuda osta medolo videblaj per magneta resonanca bildigo (MRB). Ili estas sufiĉe oftaj ĉe individuoj kun asociitaj simptomoj1. Multaj studoj emfazis la gravecon de MC pro ĝia asocio kun lumbalgio (LBP)2,3. de Roos et al.4 kaj Modic et al.5 sendepende unue priskribis tri malsamajn tipojn de subkondraj signalanomalioj en la vertebra osta medolo. Modikaj ŝanĝoj de tipo I estas hipointensaj sur T1-pezbalancitaj (T1W) sekvencoj kaj hiperintensaj sur T2-pezbalancitaj (T2W) sekvencoj. Ĉi tiu lezo rivelas fisurajn finaĵplatojn kaj apudan angian granulacian histon en la osta medolo. Modikaj ŝanĝoj de tipo II montras altan signalon en kaj T1W kaj T2W sekvencoj. En ĉi tiu tipo de lezo, oni povas trovi detruon de la finaĵplato, same kiel histologian grasan anstataŭigon de la apuda osta medolo. Modikaj ŝanĝoj de tipo III montras malaltan signalon en T1W kaj T2W sekvencoj. Sklerozaj lezoj respondantaj al la finaĵplatoj estis observitaj6. MC estas konsiderata patologia malsano de la spino kaj estas proksime asociita kun multaj degeneraj malsanoj de la spino7,8,9.
Konsiderante la disponeblajn datumojn, pluraj studoj provizis detalajn komprenojn pri la etiologio kaj patologiaj mekanismoj de MC. Albert kaj aliaj sugestis, ke MC povus esti kaŭzita de diska herniiĝo8. Hu kaj aliaj atribuis MC al severa diska degenero10. Kroc proponis la koncepton de "interna diska krevo", kiu asertas, ke ripetema diska traŭmato povas konduki al mikroŝiroj en la finaĵplato. Post la formado de fendiĝo, detruo de finaĵplato fare de la pulposa nukleo (NP) povas ekigi aŭtoimunan respondon, kiu plue kondukas al la disvolviĝo de MC11. Ma kaj aliaj dividis similan vidpunkton kaj raportis, ke NP-induktita aŭtoimuneco ludas ŝlosilan rolon en la patogenezo de MC12.
Ĉeloj de la imunsistemo, precipe CD4+ T-helpantaj limfocitoj, ludas gravan rolon en la patogenezo de aŭtoimuneco13. La ĵus malkovrita subaro Th17 produktas la proinflaman citokinon IL-17, antaŭenigas la esprimon de kemokinoj, kaj stimulas T-ĉelojn en difektitaj organoj por produkti IFN-γ14. Th2-ĉeloj ankaŭ ludas unikan rolon en la patogenezo de imunaj respondoj. Esprimo de IL-4 kiel reprezenta Th2-ĉelo povas konduki al severaj imunopatologiaj sekvoj15.
Kvankam multaj klinikaj studoj estis faritaj pri MC16,17,18,19,20,21,22,23,24, ankoraŭ mankas taŭgaj bestaj eksperimentaj modeloj, kiuj povas imiti la MC-procezon, kiu ofte okazas ĉe homoj kaj povas esti uzataj por esplori la etiologion aŭ novajn traktadojn kiel ekzemple celita terapio. Ĝis nun, nur kelkaj bestaj modeloj de MC estis raportitaj por studi la subestajn patologiajn mekanismojn.
Bazite sur la aŭtoimuna teorio proponita de Albert kaj Ma, ĉi tiu studo establis simplan kaj reprodukteblan kuniklan MC-modelon per aŭtotransplantado de NP proksime al la borita vertebra finaĵplato. Aliaj celoj estas observi la histologiajn karakterizaĵojn de la bestaj modeloj kaj taksi la specifajn mekanismojn de NP en la evoluo de MC. Por tiu celo, ni uzas teknikojn kiel molekula biologio, MR-bildado kaj histologiaj studoj por studi la progreson de MC.
Du kunikloj mortis pro sangado dum kirurgio, kaj kvar kunikloj mortis dum anestezo dum MR-bildigo. La ceteraj 48 kunikloj postvivis kaj montris neniujn kondutajn aŭ neŭrologiajn signojn post la kirurgio.
MR-bildoj montras, ke la signalintenseco de la enigita histo en malsamaj truoj estas malsama. La signalintenseco de la L5-vertebra korpo en la NPE-grupo iom post iom ŝanĝiĝis je 12, 16 kaj 20 semajnoj post la enmeto (T1W-sekvenco montris malaltan signalon, kaj T2W-sekvenco montris miksitan signalon plus malaltan signalon) (Fig. 1C), dum la MR-aspektoj de la aliaj du grupoj de enigitaj partoj restis relative stabilaj dum la sama periodo (Fig. 1A, B).
(A) Reprezentaj sinsekvaj MR-bildoj de la lumba spino de kuniklo je 3 tempopunktoj. Neniuj signalanomalioj estis trovitaj en la bildoj de la ŝajnoperacia grupo. (B) La signalkarakterizaĵoj de la vertebra korpo en la ME-grupo estas similaj al tiuj en la ŝajnoperacia grupo, kaj neniu signifa signalŝanĝo estas observita ĉe la enkorpiĝa loko laŭlonge de la tempo. (C) En la NPE-grupo, la malalta signalo estas klare videbla en la T1W-sekvenco, kaj la miksita signalo kaj malalta signalo estas klare videblaj en la T2W-sekvenco. De la 12-semajna periodo ĝis la 20-semajna periodo, la sporadaj altaj signaloj ĉirkaŭ la malaltaj signaloj en la T2W-sekvenco malpliiĝas.
Evidenta osta hiperplazio videblas ĉe la implantaĵa loko de la vertebra korpo en la NPE-grupo, kaj la osta hiperplazio okazas pli rapide de 12 ĝis 20 semajnoj (Fig. 2C) kompare kun la NPE-grupo, neniu signifa ŝanĝo estas observata en la modelitaj vertebraj korpoj; Sham-grupo kaj ME-grupo (Fig. 2C) 2A,B).
(A) La surfaco de la vertebra korpo ĉe la enplantita parto estas tre glata, la truo bone resaniĝas, kaj ne estas hiperplazio en la vertebra korpo. (B) La formo de la enplantita loko en la ME-grupo similas al tiu en la ŝajnoperacia grupo, kaj ne estas evidenta ŝanĝo en la aspekto de la enplantita loko laŭlonge de la tempo. (C) Osta hiperplazio okazis ĉe la enplantita loko en la NPE-grupo. La osta hiperplazio rapide pliiĝis kaj eĉ etendiĝis tra la intervertebra disko al la kontraŭflanka vertebra korpo.
Histologia analizo provizas pli detalajn informojn pri ostformado. Figuro 3 montras la fotojn de la postoperaciaj sekcioj makulitaj per H&E. En la ŝajnoperacia grupo, la kondrocitoj estis bone aranĝitaj kaj neniu ĉelmultobliĝo estis detektita (Fig. 3A). La situacio en la ME-grupo estis simila al tiu en la ŝajnoperacia grupo (Fig. 3B). Tamen, en la NPE-grupo, granda nombro da kondrocitoj kaj proliferado de NP-similaj ĉeloj estis observitaj ĉe la implantada loko (Fig. 3C);
(A) Trabekuloj videblas proksime al la fina plato, la kondrocitoj estas ordigitaj kun unuforma ĉelgrandeco kaj formo kaj sen proliferado (40 fojojn). (B) La stato de la implanta loko en la ME-grupo similas al tiu de la ŝajngrupo. Trabekuloj kaj kondrocitoj videblas, sed ne estas evidenta proliferado ĉe la implanta loko (40 fojojn). (B) Videblas, ke kondrocitoj kaj NP-similaj ĉeloj signife proliferas, kaj la formo kaj grandeco de la kondrocitoj estas neegalaj (40 fojojn).
La esprimo de interleukin 4 (IL-4) mRNA, interleukin 17 (IL-17) mRNA, kaj interferon γ (IFN-γ) mRNA estis observita en ambaŭ la NPE- kaj ME-grupoj. Kiam la esprimniveloj de celgenoj estis komparitaj, la genekspresioj de IL-4, IL-17, kaj IFN-γ estis signife pliigitaj en la NPE-grupo kompare kun tiuj de la ME-grupo kaj la ŝajnoperacia grupo (Fig. 4) (P < 0.05). Kompare kun la ŝajnoperacia grupo, la esprimniveloj de IL-4, IL-17, kaj IFN-γ en la ME-grupo pliiĝis nur iomete kaj ne atingis statistikan ŝanĝon (P > 0.05).
La mRNA-esprimo de IL-4, IL-17 kaj IFN-γ en la NPE-grupo montris signife pli altan tendencon ol tiuj en la ŝajnoperacia grupo kaj la ME-grupo (P < 0.05).
Kontraste, la esprimniveloj en la ME-grupo montris neniun signifan diferencon (P>0.05).
Okcidenta makulanalizo estis farita uzante komerce haveblajn antikorpojn kontraŭ IL-4 kaj IL-17 por konfirmi la ŝanĝitan mRNA-esprimpadronon. Kiel montrite en Figuroj 5A,B, kompare kun la ME-grupo kaj la ŝajnoperacia grupo, la proteinaj niveloj de IL-4 kaj IL-17 en la NPE-grupo estis signife pliigitaj (P < 0.05). Kompare kun la ŝajnoperacia grupo, la proteinaj niveloj de IL-4 kaj IL-17 en la ME-grupo ankaŭ ne atingis statistike signifajn ŝanĝojn (P> 0.05).
(A) La proteinaj niveloj de IL-4 kaj IL-17 en la NPE-grupo estis signife pli altaj ol tiuj en la ME-grupo kaj placebo-grupo (P < 0,05). (B) Okcidenta makuleca histogramo.
Pro la limigita nombro da homaj specimenoj akiritaj dum kirurgio, klaraj kaj detalaj studoj pri la patogenezo de MC estas iom malfacilaj. Ni provis establi bestan modelon de MC por studi ĝiajn eblajn patologiajn mekanismojn. Samtempe, radiologia, histologia kaj molekulbiologia taksado estis uzitaj por sekvi la kurson de MC induktita de NP-aŭtotransplantaĵo. Rezulte, la NP-implantada modelo rezultigis laŭpaŝan ŝanĝon en signalintenseco de 12-semajnaj ĝis 20-semajnaj tempopunktoj (miksita malalta signalo en T1W-sekvencoj kaj malalta signalo en T2W-sekvencoj), indikante histajn ŝanĝojn, kaj la histologiaj kaj molekulbiologiaj taksadoj konfirmis la rezultojn de la radiologia studo.
La rezultoj de ĉi tiu eksperimento montras, ke vidaj kaj histologiaj ŝanĝoj okazis ĉe la loko de la vertebra lezo en la NPE-grupo. Samtempe, la esprimo de la genoj IL-4, IL-17 kaj IFN-γ, same kiel IL-4, IL-17 kaj IFN-γ estis observita, indikante, ke la lezo de aŭtologa pulpa nukleo en la vertebra korpo povas kaŭzi serion da signalaj kaj morfologiaj ŝanĝoj. Estas facile trovi, ke la signalaj karakterizaĵoj de la vertebraj korpoj de la besta modelo (malalta signalo en la T1W-sekvenco, miksita signalo kaj malalta signalo en la T2W-sekvenco) estas tre similaj al tiuj de homaj vertebraj ĉeloj, kaj la MRI-karakterizaĵoj ankaŭ konfirmas la observojn de histologio kaj kruda anatomio, tio estas, la ŝanĝoj en la vertebraj ĉeloj estas progresemaj. Kvankam la inflama respondo kaŭzita de akuta traŭmato povas aperi baldaŭ post trapiko, MRI-rezultoj montris, ke progresemaj kreskantaj signalaj ŝanĝoj aperis 12 semajnojn post trapiko kaj daŭris ĝis 20 semajnoj sen iuj signoj de resaniĝo aŭ inversigo de MRI-ŝanĝoj. Ĉi tiuj rezultoj sugestas, ke aŭtologa vertebra NP estas fidinda metodo por establi progreseman MV en kunikloj.
Ĉi tiu trapikiĝmodelo postulas adekvatan kapablon, tempon kaj kirurgian penon. En preparaj eksperimentoj, dissekcio aŭ troa stimulo de la paravertebraj ligamentaj strukturoj povas rezultigi la formadon de vertebraj osteofitoj. Oni devas zorgi ne difekti aŭ iriti la apudajn diskojn. Ĉar la profundo de penetro devas esti kontrolita por atingi koherajn kaj reprodukteblajn rezultojn, ni mane faris ŝtopilon fortranĉante la ingon de 3 mm longa pinglo. Uzi ĉi tiun ŝtopilon certigas unuforman boradprofundon en la vertebra korpo. En preparaj eksperimentoj, tri ortopediaj kirurgoj implikitaj en la operacio trovis, ke 16-mezurilaj pingloj estas pli facile uzeblaj ol 18-mezurilaj pingloj aŭ aliaj metodoj. Por eviti troan sangadon dum borado, teni la pinglon senmove dum iom da tempo provizos pli taŭgan enmettruon, sugestante, ke certa grado de MC povas esti kontrolita tiamaniere.
Kvankam multaj studoj celis MC, malmulte oni scias pri la etiologio kaj patogenezo de MC25,26,27. Surbaze de niaj antaŭaj studoj, ni trovis, ke aŭtoimuneco ludas ŝlosilan rolon en la apero kaj evoluo de MC12. Ĉi tiu studo ekzamenis la kvantan esprimon de IL-4, IL-17, kaj IFN-γ, kiuj estas la ĉefaj diferenciĝaj vojoj de CD4+ ĉeloj post antigena stimulo. En nia studo, kompare kun la negativa grupo, la NPE-grupo havis pli altan esprimon de IL-4, IL-17, kaj IFN-γ, kaj la proteinaj niveloj de IL-4 kaj IL-17 ankaŭ estis pli altaj.
Klinike, la esprimo de IL-17 mRNA estas pliigita en NP-ĉeloj de pacientoj kun diskherniiĝo28. Pliigitaj niveloj de esprimo de IL-4 kaj IFN-γ ankaŭ estis trovitaj en modelo de akuta ne-kunprema diskherniiĝo kompare kun sanaj kontroloj29. IL-17 ludas ŝlosilan rolon en inflamo, hista vundo en aŭtoimunaj malsanoj30 kaj plifortigas la imunan respondon al IFN-γ31. Plifortigita IL-17-mediaciita hista vundo estis raportita en MRL/lpr-musoj32 kaj aŭtoimune-sentemaj musoj33. IL-4 povas inhibicii la esprimon de proinflamatoriaj citokinoj (kiel IL-1β kaj TNFα) kaj makrofagan aktivigon34. Estis raportite, ke la mRNA-esprimo de IL-4 estis malsama en la NPE-grupo kompare kun IL-17 kaj IFN-γ en la sama tempo; La mRNA-esprimo de IFN-γ en la NPE-grupo estis signife pli alta ol tiu en la aliaj grupoj. Tial, IFN-γ-produktado povas esti mediaciisto de la inflama respondo induktita de NP-interkaliĝo. Studoj montris, ke IFN-γ estas produktata de pluraj ĉeltipoj, inkluzive de aktivigitaj tipo 1 helpantaj T-ĉeloj, naturaj murdĉeloj kaj makrofagoj35,36, kaj estas ŝlosila porinflama citokino, kiu antaŭenigas imunajn respondojn37.
Ĉi tiu studo sugestas, ke aŭtoimuna respondo povus esti implikita en la apero kaj disvolviĝo de MC. Luoma et al. trovis, ke la signalkarakterizaĵoj de MC kaj elstara NP estas similaj per MRI, kaj ambaŭ montras altan signalon en T2W-sekvenco38. Kelkaj citokinoj estis konfirmitaj kiel proksime asociitaj kun la apero de MC, kiel ekzemple IL-139. Ma et al. sugestis, ke la suprena aŭ malsuprena elstaraĵo de NP povus havi grandan influon sur la apero kaj disvolviĝo de MC12. Bobechko40 kaj Herzbein et al.41 raportis, ke NP estas imunotolerema histo, kiu ne povas eniri la angian cirkuladon ekde naskiĝo. NP-elstaraĵoj enkondukas fremdajn korpojn en la sangoprovizon, tiel mediaciante lokajn aŭtoimunajn reagojn42. Aŭtoimunaj reagoj povas indukti grandan nombron da imunaj faktoroj, kaj kiam ĉi tiuj faktoroj estas kontinue eksponitaj al histoj, ili povas kaŭzi ŝanĝojn en signalado43. En ĉi tiu studo, troesprimo de IL-4, IL-17 kaj IFN-γ estas tipaj imunaj faktoroj, plue pruvante la proksiman rilaton inter NP kaj MC-oj44. Ĉi tiu besta modelo bone imitas la trarompon kaj eniron de NP en la finaĵplaton. Ĉi tiu procezo plue rivelis la efikon de aŭtoimuneco sur MC.
Kiel atendate, ĉi tiu besta modelo provizas al ni eblan platformon por studi MC. Tamen, ĉi tiu modelo ankoraŭ havas kelkajn limigojn: unue, dum la besta observadfazo, iuj mezstadiaj kunikloj bezonas esti eŭtanaziigitaj por histologiaj kaj molekulbiologiaj testoj, do iuj bestoj "ĉesas uzi" laŭlonge de la tempo. Due, kvankam tri tempopunktoj estas difinitaj en ĉi tiu studo, bedaŭrinde ni nur modelis unu tipon de MC (Modika tipo I ŝanĝo), do ĝi ne sufiĉas por reprezenti la homan malsanevoluan procezon, kaj pli da tempopunktoj devas esti difinitaj por pli bone observi ĉiujn signalŝanĝojn. Trie, la ŝanĝoj en hista strukturo efektive povas esti klare montritaj per histologia kolorado, sed iuj specialigitaj teknikoj povas pli bone riveli la mikrostrukturajn ŝanĝojn en ĉi tiu modelo. Ekzemple, polarigita luma mikroskopio estis uzata por analizi la formadon de fibrokartilago en kuniklaj intervertebraj diskoj45. La longdaŭraj efikoj de NP sur MC kaj finaĵplato postulas plian studon.
Kvindek kvar masklaj blankaj kunikloj de Nov-Zelando (pezo ĉirkaŭ 2,5-3 kg, aĝo 3-3,5 monatoj) estis hazarde dividitaj en ŝajnoperacian grupon, muskolan implantadan grupon (ME-grupo) kaj nervradikan implantadan grupon (NPE-grupo). Ĉiuj eksperimentaj proceduroj estis aprobitaj de la Etika Komitato de la Tianjin-a Hospitalo, kaj la eksperimentaj metodoj estis efektivigitaj strikte konforme al la aprobitaj gvidlinioj.
Kelkaj plibonigoj estis faritaj al la kirurgia tekniko de S. Sobajima 46. Ĉiu kuniklo estis metita en lateralan kuŝpozicion kaj la antaŭa surfaco de kvin sinsekvaj lumbaj intervertebraj diskoj (IVD-oj) estis eksponita uzante posterolateralan retroperitonean aliron. Ĉiu kuniklo ricevis ĝeneralan anestezon (20% uretano, 5 ml/kg per la orelvejno). Longitudala haŭta incizo estis farita de la malsupra rando de la ripoj ĝis la pelva rando, 2 cm ventre al la paravertebraj muskoloj. La dekstra anterolaterala spino de L1 ĝis L6 estis eksponita per akra kaj malakra dissekcio de la supra subhaŭta histo, retroperitonea histo kaj muskoloj (Fig. 6A). La diska nivelo estis determinita uzante la pelvan randon kiel anatomian orientilon por la diska nivelo L5-L6. Uzu 16-mezurilan pikpinglon por bori truon proksime al la fina plato de la L5-vertebro ĝis profundo de 3 mm (Fig. 6B). Uzu 5-ml injektilon por aspiri la aŭtologan pulposan nukleon en la intervertebra disko L1-L2 (Fig. 6C). Forigu la pulposan nukleon aŭ muskolon laŭ la bezonoj de ĉiu grupo. Post kiam la bortruo estas profundigita, resorbeblaj suturoj estas metitaj sur la profundan fascion, supraĵan fascion kaj haŭton, zorgante ne difekti la periostan histon de la vertebra korpo dum la kirurgio.
(A) La disko L5–L6 estas eksponita per posterolaterala retroperitonea alproksimiĝo. (B) Uzu 16-mezurilan pinglon por bori truon proksime al la L5-finaĵplato. (C) Aŭtologaj MF-oj estas rikoltitaj.
Ĝenerala anestezo estis administrita per 20% uretano (5 ml/kg) administrita per la orelvejno, kaj lumbaj spinaj rentgenaj bildoj estis ripetitaj je 12, 16 kaj 20 semajnoj postoperacie.
Kunikloj estis buĉitaj per intramuskola injekto de ketamino (25.0 mg/kg) kaj intravejna natria pentobarbitalo (1.2 g/kg) je 12, 16 kaj 20 semajnoj post la kirurgio. La tuta spino estis forigita por histologia analizo kaj reala analizo estis farita. Kvanta inversa transskribo (RT-qPCR) kaj okcidenta makulumado estis uzitaj por detekti ŝanĝojn en imunaj faktoroj.
MRI-ekzamenoj estis faritaj ĉe kunikloj uzante 3.0 T klinikan magneton (GE Medical Systems, Florenco, SC) ekipitan per orta membrovolvaĵa ricevilo. Kunikloj estis narkotitaj per 20% uretano (5 mL/kg) tra la orelvejno kaj poste metitaj kuŝante ene de la magneto kun la lumba regiono centrita sur 5-cola diametro de cirkla surfaca volvaĵo (GE Medical Systems). Koronaj T2-pezbalancitaj lokigilaj bildoj (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) estis akiritaj por difini la lokon de la lumba disko de L3–L4 ĝis L5–L6. Sagitalebenaj T2-pezbalancitaj tranĉaĵoj estis akiritaj kun la jenaj agordoj: rapida spin-eĥa sekvenco kun ripettempo (TR) de 2200 ms kaj eĥtempo (TE) de 70 ms, matrico; vidkampo de 260 kaj ok stimuloj; La tranĉdikeco estis 2 mm, la interspaco estis 0.2 mm.
Post kiam la lasta foto estis prenita kaj la lasta kuniklo estis mortigita, la ŝajndiskoj, muskol-enmetitaj, kaj NP-diskoj estis forigitaj por histologia ekzameno. La histoj estis fiksitaj en 10% neŭtrale bufrita formalino dum 1 semajno, senkalkigitaj per etilendiaminotetraacetata acido, kaj sekcigitaj per parafino. La histoblokoj estis enmetitaj en parafinon kaj tranĉitaj en sagitalajn sekciojn (5 μm dikajn) uzante mikrotomon. La sekcioj estis koloritaj per hematoksilino kaj eozino (H&E).
Post kolektado de la intervertebraj diskoj de la kunikloj en ĉiu grupo, totala RNA estis ekstraktita uzante UNIQ-10-kolumnon (Shanghai Sangon Biotechnology Co., Ltd., Ĉinio) laŭ la instrukcioj de la fabrikanto kaj ImProm II-inversan transskriban sistemon (Promega Inc., Madison, WI, Usono). Inversa transskribo estis farita.
RT-qPCR estis plenumita uzante Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., Usono) kaj SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Usono) laŭ la instrukcioj de la fabrikanto. La PCR-reakcia volumeno estis 20 μl kaj enhavis 1.5 μl da diluita cDNA kaj 0.2 μM da ĉiu prajmeroj. Prajmeroj estis desegnitaj de OligoPerfect Designer (Invitrogen, Valencia, CA) kaj fabrikitaj de Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Ĉinio) (Tabelo 1). La jenaj termikaj ciklaj kondiĉoj estis uzitaj: komenca polimeraza aktiviga paŝo je 94°C dum 2 minutoj, poste 40 cikloj de 15 sekundoj ĉiu je 94°C por ŝablondenaturigo, kalcinado dum 1 minuto je 60°C, etendo kaj fluoresko. Mezuradoj estis plenumitaj dum 1 minuto je 72°C. Ĉiuj specimenoj estis amplifitaj tri fojojn kaj la averaĝa valoro estis uzita por RT-qPCR-analizo. Amplifikaj datumoj estis analizitaj per FlexStation 3 (Molecular Devices, Sunnyvale, Kalifornio, Usono). La esprimo de la genoj IL-4, IL-17, kaj IFN-γ estis normaligita al la endogena kontrolo (ACTB). Relativaj esprimniveloj de la cela mRNA estis kalkulitaj per la metodo 2-ΔΔCT.
Totala proteino estis ekstraktita el histoj uzante histan homogenigilon en RIPA-liza bufro (enhavanta proteazon kaj fosfatazan inhibitoran koktelon) kaj poste centrifugita je 13,000 rpm dum 20 minutoj je 4°C por forigi histajn restaĵojn. Kvindek mikrogramoj da proteino estis ŝarĝitaj por ĉiu leno, apartigitaj per 10% SDS-PAGE, kaj poste transdonitaj al PVDF-membrano. Blokado estis farita en 5% sengrasa seka lakto en Tris-bufrita salakvo (TBS) enhavanta 0.1% Tween 20 dum 1 horo je ĉambra temperaturo. La membrano estis inkubita kun kunikla kontraŭ-dekorina primara antikorpo (diluita 1:200; Boster, Vuhano, Ĉinio) (diluita 1:200; Bioss, Pekino, Ĉinio) dum la nokto je 4°C kaj reagis en la dua tago; kun sekundara antikorpo (kapra kontraŭ-kunikla imunoglobulino G je diluo de 1:40.000) kombinita kun krenoperoksidazo (Boster, Vuhano, Ĉinio) dum 1 horo je ĉambra temperaturo. Okcidentaj makulsignaloj estis detektitaj per pliigita kemiluminesko sur la kemilumineska membrano post rentgen-surradiado. Por densitometria analizo, makuloj estis skanitaj kaj kvantigitaj uzante BandScan-programaron kaj la rezultoj estis esprimitaj kiel la rilatumo de imunoreaktiveco de celgena tipo al imunoreaktiveco de tubulino.
Statistikaj kalkuloj estis faritaj per la programaro SPSS16.0 (SPSS, Usono). Datumoj kolektitaj dum la studo estis esprimitaj kiel meznombro ± norma devio (meznombro ± norma devio) kaj analizitaj per unudirekta ripeta mezura analizo de varianco (ANOVA) por determini diferencojn inter la du grupoj. P < 0.05 estis konsiderata statistike signifa.
Tiel, la establado de besta modelo de MC per enplantado de aŭtologaj nanopartikloj en la vertebran korpon kaj plenumado de makroanatomia observado, MR-analizo, histologia taksado kaj molekulbiologia analizo povus fariĝi grava ilo por taksi kaj kompreni la mekanismojn de homa MC kaj evoluigi novajn terapiajn intervenojn.
Kiel citi ĉi tiun artikolon: Han, C. et al. Besta modelo de modikaj ŝanĝoj estis establita per enplantado de aŭtologa pulpa nukleo en la subkondran oston de la lumba spino. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/srep35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., kaj Boos, N. Magneta resonanca bildigo de la lumba spino: tropezo de diskherniiĝo kaj reteno, nervradika kunpremo, finaĵplataj anomalioj, kaj faceta artika osteoartrito en sensimptomaj volontuloj. rate. Radiology 209, 661–666, doi:10.1148/radiology.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, kaj Leboeuf-Eed, K. Modikaj ŝanĝoj kaj ilia rilato al klinikaj trovoj. European Spine Journal: oficiala publikaĵo de la European Spine Society, la European Society of Spinal Deformity, kaj la European Society for Cervical Spine Research 15, 1312–1319, doi: 10.1007/s00586-006-0185-x (2006).
Kuisma, M., et al. Modaj ŝanĝoj en la lumbaj vertebraj finaĵplatoj: tropezo kaj asocio kun lumba doloro kaj iskiatalgio ĉe mezaĝaj viraj laboristoj. Spine 32, 1116–1122, doi:10.1097/01.brs.0000261561.12944.ff (2007).
de Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., kaj Dalinka, M. MR-bildo de ŝanĝoj de osta medolo proksime al la fina plato en degenera malsano de la lumba spino. AJR. American Journal of Radiology 149, 531–534, doi: 10.2214/ajr.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, kaj Carter, JR Degenera diska malsano: taksado de vertebraj medolŝanĝoj per MRI. Radiology 166, 193–199, doi:10.1148/radiology.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, kaj Carter, JR. Bildigo de degenera diska malsano. Radiology 168, 177–186, doi: 10.1148/radiology.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Antaŭdirantoj de neovertebra finaĵoplato (Modic) signalas ŝanĝojn en la ĝenerala populacio. European Spine Journal: Oficiala Publikaĵo de la European Spine Society, la European Society of Spinal Deformity, kaj la European Society for Cervical Spine Research, Divizio 19, 129–135, doi: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB kaj Mannisch, K. Modikaj ŝanĝoj post lumba diska herniiĝo. European Spine Journal: Oficiala Publikigo de la European Spine Society, la European Society of Spinal Deformity kaj la European Society for Cervical Spine Research 16, 977–982, doi: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., kaj Kaapa, E. Ŝanĝoj de modika tipo I povas antaŭdiri rapide progreseman deformigan diskan degeneron: 1-jara prospektiva studo. European Spine Journal 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ kaj Fan, SW. Modikaj ŝanĝoj: eblaj kaŭzoj kaj kontribuo al lumba diska degenero. Medicinaj Hipotezoj 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV Interna diska krevo. Problemoj pri diska prolapso dum pli ol 50 jaroj. Spine (Phila Pa 1976) 11, 650–653 (1986).
Afiŝtempo: 13-a de decembro 2024