Dankon, ke vi vizitis Nature.com. La retumila versio, kiun vi uzas, havas limigitan CSS -subtenon. Por plej bonaj rezultoj, ni rekomendas uzi pli novan retumilon (aŭ malebligi kongruan reĝimon en Interreta Esplorilo). Intertempe, por certigi daŭran subtenon, ni montros la retejon sen stiloj kaj JavaScript.
La starigo de bestaj modeloj de moda ŝanĝo (MC) estas grava bazo por studado de MC. Kvindek kvar Nov-Zelandaj blankaj kunikloj estis dividitaj en ŝam-operacian grupon, muskolan enplantaĵan grupon (ME-grupo) kaj kerno pulposus-enplantaĵgrupo (NPE-grupo). En la NPE -grupo, la intervertebra disko estis elmontrita per anterolateral lumba kirurgia alproksimiĝo kaj kudrilo estis uzata por piki la vertebran korpon de L5 proksime al la fina plato. NP estis ĉerpita el la intervertebra disko L1/2 per siringo kaj injektita en ĝin. Borante truon en la subkondra osto. La kirurgiaj proceduroj kaj boradaj metodoj en la muskola enplantaĵgrupo kaj la ŝam-operacia grupo estis la samaj kiel tiuj en la NP-enplantaĵa grupo. En la grupo ME, peco de muskolo estis metita en la truon, dum en la ŝam-operacia grupo, nenio estis metita en la truon. Post la operacio, MRI -skanado kaj molekula biologia testado estis faritaj. La signalo en la NPE-grupo ŝanĝiĝis, sed ne estis evidenta signalŝanĝo en la ŝam-operacia grupo kaj la ME-grupo. Histologia observado montris, ke nenormala histo-proliferado estis observita ĉe la enplantaĵa loko, kaj la esprimo de IL-4, IL-17 kaj IFN-γ estis pliigita en la NPE-grupo. Enplantado de NP en la subkondran oston povas formi bestan modelon de MC.
Modaj ŝanĝoj (MC) estas lezoj de la vertebraj finaĵoj kaj apuda osta medolo videbla sur magneta resonanca bildigo (MRI). Ili estas sufiĉe oftaj ĉe individuoj kun asociitaj simptomoj1. Multaj studoj emfazis la gravecon de MC pro ĝia asocio kun malalta malantaŭa doloro (LBP) 2,3. De Roos et al.4 kaj Modic et al.5 sendepende unue priskribis tri malsamajn specojn de subkondraj signalaj anormalecoj en la vertebra osta medolo. Modaj tipoj I-ŝanĝoj estas hipointensaj sur T1-pezitaj (T1W) sekvencoj kaj hiperintense sur T2-pezitaj (T2W) sekvencoj. Ĉi tiu lezo rivelas fendajn finaĵojn kaj apudajn vaskulajn granulajn histojn en la osta medolo. Modikaj tipo II -ŝanĝoj montras altan signalon sur ambaŭ T1W kaj T2W -sekvencoj. En ĉi tiu tipo de lezo, finaj detruo troveblas, same kiel histologia grasa anstataŭigo de la apuda osta medolo. Modaj tipo III -ŝanĝoj montras malaltan signalon en T1W kaj T2W -sekvencoj. Sklerotaj lezoj respondaj al la finplatoj estis observitaj6. MC estas konsiderata patologia malsano de la spino kaj estas proksime asociita kun multaj degeneraj malsanoj de la spino7,8,9.
Konsiderante la disponeblajn datumojn, pluraj studoj disponigis detalajn komprenojn pri la etiologio kaj patologiaj mekanismoj de MC. Albert et al. sugestis, ke MC eble estos kaŭzita de disko -hernia8. Hu et al. Atribuita MC al severa disko -degenerado10. Kroc proponis la koncepton de "interna disko -rompo", kiu deklaras, ke ripetema disko -traŭmato povas konduki al mikrotearoj en la fino. Post fendita formado, finplato detruo de la kerno pulposus (NP) povas deĉenigi autoinmunan respondon, kio plue kondukas al la disvolviĝo de MC11. Ma et al. dividis similan vidon kaj raportis, ke NP-induktita aŭtoimuneco ludas ŝlosilan rolon en la patogenesis de MC12.
Imunosistemaj ĉeloj, precipe CD4+ T helpaj limfocitoj, ludas kritikan rolon en la patogenesis de aŭtoimuneco13. La lastatempe malkovrita Th17-subaro produktas la proinflaman citokinon IL-17, antaŭenigas kemiokinan esprimon kaj stimulas T-ĉelojn en damaĝitaj organoj por produkti IFN-γ14. TH2 -ĉeloj ankaŭ ludas unikan rolon en la patogenesis de imunaj respondoj. Esprimo de IL-4 kiel reprezenta TH2-ĉelo povas konduki al severaj imunopatologiaj konsekvencoj15.
Kvankam multaj klinikaj studoj estis faritaj sur MC16,17,18,19,20,21,22,23,24 Uzita por esplori la etiologion aŭ novajn traktadojn kiel celitan terapion. Ĝis nun, nur kelkaj bestaj modeloj de MC estis raportitaj studi la subajn patologiajn mekanismojn.
Surbaze de la aŭtoimuna teorio proponita de Albert kaj MA, ĉi tiu studo establis simplan kaj reprodukteblan kuniklan MC -modelon per aŭtotransplantado de NP proksime de la brita vertebra fina plato. Aliaj celoj estas observi la histologiajn trajtojn de la bestaj modeloj kaj taksi la specifajn mekanismojn de NP en la disvolviĝo de MC. Tiucele, ni uzas teknikojn kiel molekula biologio, MRI, kaj histologiaj studoj por studi la progresadon de MC.
Du kunikloj mortis pro sangado dum kirurgio, kaj kvar kunikloj mortis dum anestezio dum MRI. La ceteraj 48 kunikloj postvivis kaj montris neniujn kondutajn aŭ neŭrologiajn signojn post kirurgio.
MRI montras, ke la signala intenseco de la enigita histo en malsamaj truoj estas malsama. La signala intenseco de la vertebra korpo L5 en la NPE -grupo iom post iom ŝanĝiĝis je 12, 16 kaj 20 semajnoj post la enmeto (T1W -sekvenco montris malaltan signalon, kaj T2W -sekvenco montris miksitan signalon plus malaltan signalon) (Fig. 1C), dum la MRI -aspektoj El la aliaj du grupoj de enigitaj partoj restis relative stabilaj dum la sama periodo (Fig. 1a, b).
(A) Reprezentaj sinsekvaj MRI -oj de la kuniklo -lumba spino ĉe 3 tempopunktoj. Neniuj signalaj anormalecoj estis trovitaj en la bildoj de la ŝam-operacia grupo. (B) La signalaj trajtoj de la vertebra korpo en la ME-grupo estas similaj al tiuj en la ŝam-operacia grupo, kaj neniu signifa signalŝanĝo estas observata ĉe la enmeta loko kun la tempo. (C) En la NPE -grupo, la malalta signalo estas klare videbla en la T1W -sekvenco, kaj la miksita signalo kaj malalta signalo estas klare videblaj en la T2W -sekvenco. De la 12-semajna periodo ĝis la 20-semajna periodo, la sporadaj altaj signaloj ĉirkaŭantaj la malaltajn signalojn en la T2W-sekvenco malpliiĝas.
Evidenta osto -hiperplasia videblas ĉe la enplantaĵa loko de la vertebra korpo en la NPE -grupo, kaj la osta hiperplasia okazas pli rapide de 12 ĝis 20 semajnoj (Fig. 2C) kompare kun la NPE -grupo, neniu signifa ŝanĝo estas observata en la modeligita vertebro korpoj; Sham Group kaj ME Group (Fig. 2c) 2a, b).
(A) La surfaco de la vertebra korpo ĉe la enplantita porcio estas tre glata, la truo resanigas bone, kaj ne ekzistas hiperplasia en la vertebra korpo. (B) La formo de la enplantita retejo en la grupo ME estas simila al tiu en la ŝam -operacia grupo, kaj ne ekzistas evidenta ŝanĝo en la aspekto de la enplantita retejo kun la tempo. (C) osta hiperplasia okazis ĉe la enplantita loko en la NPE -grupo. La osta hiperplasia rapide kreskis kaj eĉ etendiĝis tra la intervertebra disko al la kontraŭflanka vertebra korpo.
Histologia analizo donas pli detalajn informojn pri osta formado. Figuro 3 montras la fotojn de la postoperaciaj sekcioj makulitaj kun H&E. En la ŝam-operacia grupo, la kondrocitoj estis bone aranĝitaj kaj neniu ĉela proliferado estis detektita (Fig. 3A). La situacio en la ME-grupo estis simila al tiu en la ŝam-operacia grupo (Fig. 3B). Tamen, en la NPE-grupo, granda nombro da kondrocitoj kaj proliferado de NP-similaj ĉeloj estis observitaj ĉe la enplantaĵa loko (Fig. 3C);
(A) Trabeculae videblas proksime al la fina plato, la kondrocitoj estas bone aranĝitaj kun uniforma ĉela grandeco kaj formo kaj neniu proliferado (40 fojojn). (B) La kondiĉo de la enplantaĵejo en la grupo ME similas al tiu de la ruza grupo. Trabeculae kaj kondrocitoj videblas, sed ne ekzistas evidenta proliferado ĉe la enplantaĵejo (40 fojojn). (B) Videblas, ke kondrocitoj kaj NP-similaj ĉeloj proliferas signife, kaj la formo kaj grandeco de kondrocitoj estas neegalaj (40 fojojn).
La esprimo de interleukino 4 (IL-4) mRNA, interleukino 17 (IL-17) mRNA, kaj interferono γ (IFN-γ) mRNA estis observitaj en la NPE kaj ME-grupoj. Kiam la esprimaj niveloj de celaj genoj estis komparitaj, la genaj esprimoj de IL-4, IL-17, kaj IFN-γ estis signife pliigitaj en la NPE-grupo kompare kun tiuj de la ME-grupo kaj la ŝam-operacia grupo (Fig. 4) (P <0.05). Kompare kun la ŝam-operacia grupo, la esprimaj niveloj de IL-4, IL-17, kaj IFN-γ en la ME-grupo pliiĝis nur iomete kaj ne atingis statistikan ŝanĝon (P> 0.05).
La mRNA-esprimo de IL-4, IL-17 kaj IFN-γ en la NPE-grupo montris signife pli altan tendencon ol tiuj en la Sham-operacia grupo kaj la ME-grupo (P <0.05).
En kontrasto, la esprimaj niveloj en la ME -grupo montris neniun signifan diferencon (P> 0.05).
Western blot-analizo estis farita uzante komerce haveblajn antikorpojn kontraŭ IL-4 kaj IL-17 por konfirmi la ŝanĝitan mRNA-esprimon. Kiel montrite en Figuroj 5a, B, kompare kun la grupo ME kaj la sham-operacia grupo, la proteinaj niveloj de IL-4 kaj IL-17 en la NPE-grupo estis signife pliigitaj (P <0.05). Kompare kun la ŝam-operacia grupo, la proteinaj niveloj de IL-4 kaj IL-17 en la ME-grupo ankaŭ ne atingis statistike signifajn ŝanĝojn (P> 0.05).
(A) La proteinaj niveloj de IL-4 kaj IL-17 en la NPE-grupo estis signife pli altaj ol tiuj en la grupo ME-grupo kaj placebo (P <0.05). (B) Okcidenta blot -histogramo.
Pro la limigita nombro de homaj specimenoj akiritaj dum kirurgio, klaraj kaj detalaj studoj pri la patogenesis de MC estas iom malfacilaj. Ni provis establi bestan modelon de MC por studi ĝiajn eblajn patologiajn mekanismojn. Samtempe, radiologia taksado, histologia taksado kaj molekula biologia takso estis uzataj por sekvi la kurson de MC induktita de NP -autograft. Rezulte, la NP-enplantaĵa modelo rezultigis laŭgradan ŝanĝon en signal-intenseco de 12-semajnaj ĝis 20-semajnaj tempopunktoj (miksita malalta signalo en T1W-sekvencoj kaj malalta signalo en T2W-sekvencoj), indikante histajn ŝanĝojn, kaj la histologian kaj molekulan Biologiaj taksadoj konfirmis la rezultojn de la radiologia studo.
La rezultoj de ĉi tiu eksperimento montras, ke vidaj kaj histologiaj ŝanĝoj okazis ĉe la loko de vertebra korpa malobservo en la NPE -grupo. Samtempe, la esprimo de IL-4, IL-17 kaj IFN-γ-genoj, same kiel IL-4, IL-17 kaj IFN-γ estis observitaj, indikante ke la malobservo de aŭtologa kerno pulposus-histo en la vertebro Korpo povas kaŭzi serion de signalaj kaj morfologiaj ŝanĝoj. Estas facile konstati, ke la signalaj trajtoj de la vertebraj korpoj de la besta modelo (malalta signalo en la T1W -sekvenco, miksita signalo kaj malalta signalo en la T2W -sekvenco) estas tre similaj al tiuj de homaj vertebraj ĉeloj, kaj la MRI -trajtoj ankaŭ Konfirmu la observojn de histologio kaj malneta anatomio, tio estas, ke la ŝanĝoj en la vertebraj korpaj ĉeloj progresas. Kvankam la inflama respondo kaŭzita de akra traŭmato povas aperi baldaŭ post pikado, MRI -rezultoj montris, ke iom post iom kreskantaj signalaj ŝanĝoj aperis 12 semajnojn post pikado kaj persistis ĝis 20 semajnoj sen signoj de resaniĝo aŭ inversigo de MRI -ŝanĝoj. Ĉi tiuj rezultoj sugestas, ke aŭtologa vertebra NP estas fidinda metodo por establi progresivan MV en kunikloj.
Ĉi tiu punkta modelo postulas taŭgan lertecon, tempon kaj kirurgian penadon. En antaŭparolaj eksperimentoj, disekto aŭ troa stimulado de la paravertebraj ligamentaj strukturoj povas rezultigi la formadon de vertebraj osteofitoj. Oni devas zorgi ne damaĝi aŭ iriti la apudajn diskojn. Ĉar la profundo de penetrado devas esti kontrolita por akiri konsekvencajn kaj reprodukteblajn rezultojn, ni permane faris ŝtopilon fortranĉante la tegaĵon de 3 mm longa nadlo. Uzi ĉi tiun ŝtopilon certigas unuforman boradan profundon en la vertebra korpo. En antaŭparolaj eksperimentoj, tri ortopediaj kirurgoj implikitaj en la operacio trovis 16-mezurilajn nadlojn pli facile labori kun ol 18-mezurilaj nadloj aŭ aliaj metodoj. Por eviti troan sangadon dum borado, teni la nadlon ankoraŭ dum kelka tempo provizos pli taŭgan enmetan truon, sugestante ke certa grado de MC povas esti kontrolita tiamaniere.
Kvankam multaj studoj celis MC, oni scias malmulte pri la etiologio kaj patogenesis de MC25,26,27. Surbaze de niaj antaŭaj studoj, ni trovis, ke aŭtoimuneco ludas ŝlosilan rolon en la okazo kaj disvolviĝo de MC12. Ĉi tiu studo ekzamenis la kvantan esprimon de IL-4, IL-17, kaj IFN-γ, kiuj estas la ĉefaj diferencaj vojoj de CD4+ -ĉeloj post stimulado de antigenoj. En nia studo, kompare kun la negativa grupo, la NPE-grupo havis pli altan esprimon de IL-4, IL-17, kaj IFN-γ, kaj la proteinaj niveloj de IL-4 kaj IL-17 ankaŭ estis pli altaj.
Klinike, IL-17 mRNA-esprimo estas pliigita en NP-ĉeloj de pacientoj kun disko-hernia28. Pliigitaj IL-4 kaj IFN-γ-esprimaj niveloj ankaŭ estis trovitaj en akra nekompresa disko-hernia modelo kompare kun sanaj kontroloj29. IL-17 ludas ŝlosilan rolon en inflamo, histo-vundo en aŭtoimunaj malsanoj 30 kaj plibonigas la imunan respondon al IFN-γ31. Plibonigita IL-17-mediaciita histo-vundo estis raportita en MRL/LPR-musoj32 kaj aŭtoimuneco-susceptible-musoj33. IL-4 povas malhelpi la esprimon de proinflamaj citokinoj (kiel IL-1β kaj TNFα) kaj makrofaga aktivado34. Oni raportis, ke la mRNA-esprimo de IL-4 estis malsama en la NPE-grupo kompare kun IL-17 kaj IFN-γ samtempe; La mRNA-esprimo de IFN-γ en la NPE-grupo estis signife pli alta ol tiu en la aliaj grupoj. Sekve, IFN-γ-produktado povas esti mediatoro de la inflama respondo induktita de NP-interkalkulado. Studoj montris, ke IFN-γ estas produktita de multnombraj ĉelaj tipoj, inkluzive de aktivigitaj tipo 1 helpaj T-ĉeloj, naturaj mortigaj ĉeloj kaj makrofagoj35,36, kaj estas ŝlosila kontraŭinflamatoria citokino, kiu antaŭenigas imunajn respondojn37.
Ĉi tiu studo sugestas, ke autoinmuna respondo povas esti implikita en la okazo kaj disvolviĝo de MC. Luoma et al. trovis, ke la signalaj trajtoj de MC kaj elstara NP estas similaj sur MRI, kaj ambaŭ montras altan signalon en T2W -sekvenco38. Iuj citokinoj estis konfirmitaj proksime asociitaj kun la apero de MC, kiel IL-139. Ma et al. sugestis, ke la supren aŭ malsupren protrudo de NP eble influas grandan okazon kaj disvolviĝon de MC12. Bobechko40 kaj Herzbein et al.41 raportis, ke NP estas imunotoleranta histo, kiu ne povas eniri la vaskan cirkuladon ekde naskiĝo. NP -protrudoj enkondukas eksterlandajn korpojn en la sangoprovizon, tiel mediante lokajn aŭtoimunajn reagojn42. Autoimunaj reagoj povas indukti grandan nombron da imunaj faktoroj, kaj kiam ĉi tiuj faktoroj estas kontinue elmontritaj al histoj, ili povas kaŭzi ŝanĝojn en signalado43. En ĉi tiu studo, troekspreso de IL-4, IL-17 kaj IFN-γ estas tipaj imunaj faktoroj, plue pruvante la proksiman rilaton inter NP kaj MCS44. Ĉi tiu besta modelo bone imitas la NP -progreson kaj eniron en la finplaton. Ĉi tiu procezo plue malkaŝis la efikon de aŭtoimuneco sur MC.
Kiel atendite, ĉi tiu besta modelo provizas al ni eblan platformon por studi MC. Tamen, ĉi tiu modelo ankoraŭ havas iujn limojn: Unue, dum la fazo de observado de bestoj, iuj intertempaj stadiaj kunikloj devas esti eŭtanigitaj por histologia kaj molekula biologio-testado, do iuj bestoj "falas de uzo" kun la tempo. Due, kvankam tri tempopunktoj estas agorditaj en ĉi tiu studo, bedaŭrinde, ni nur modeligis unu tipon de MC (Modic Type I Change), do ne sufiĉas reprezenti la homan malsanan disvolvan procezon, kaj pli da tempopunktoj devas esti agorditaj al Pli bone observu ĉiujn signalajn ŝanĝojn. Trie, la ŝanĝoj en histo -strukturo efektive povas esti klare montritaj per histologia makulado, sed iuj specialigitaj teknikoj povas pli bone malkaŝi la mikrostrukturajn ŝanĝojn en ĉi tiu modelo. Ekzemple, polarizita malpeza mikroskopio estis uzata por analizi la formadon de fibrocartilage en kuniklo -intervertebraj diskoj45. La longtempaj efikoj de NP sur MC kaj finplato postulas plian studadon.
Kvindek kvar viraj Nov-Zelandaj blankaj kunikloj (pezo ĉirkaŭ 2,5-3 kg, aĝo 3-3,5 monatoj) estis hazarde dividitaj en Sham Operation Group, muskola enplantaĵgrupo (ME-grupo) kaj nerva radika enplantaĵgrupo (NPE-grupo). Ĉiuj eksperimentaj proceduroj estis aprobitaj de la Etika Komitato de Tianjin -Hospitalo, kaj la eksperimentaj metodoj estis efektivigitaj strikte konforme al la aprobitaj gvidlinioj.
Iuj plibonigoj estis faritaj al la kirurgia tekniko de S. sobajima 46. Ĉiu kuniklo estis metita en flankan rekompencan pozicion kaj la antaŭa surfaco de kvin sinsekvaj lumbaraj intervertebraj diskoj (IVDoj) estis elmontrita uzante posterolateran retroperitonean aliron. Al ĉiu kuniklo oni donis ĝeneralan anestezion (20% uretano, 5 ml/kg per la orela vejno). Longforma haŭta incizo estis farita de la malsupra rando de la ripoj ĝis la pelva rando, 2 cm ventral ĝis la paravertebraj muskoloj. La dekstra anterolateral spino de L1 ĝis L6 estis elmontrita per akra kaj malakra disekto de la supra subkutana histo, retroperitoneala histo kaj muskoloj (Fig. 6A). La disko-nivelo estis determinita uzante la pelvan bordon kiel anatomia limŝtono por la L5-L6-disko-nivelo. Uzu 16-mezurilan pikan nadlon por bori truon proksime al la fina plato de la vertebro L5 ĝis profundo de 3 mm (Fig. 6B). Uzu 5-ml-seringon por aspiri la aŭtologan kernon pulposus en la intervertebra disko L1-L2 (Fig. 6C). Forigu la kernon pulpon aŭ muskolon laŭ la postuloj de ĉiu grupo. Post kiam la trua truo profundiĝas, sorbaj suturoj estas metitaj sur la profundan fascia, malprofunda fascio kaj haŭto, zorgante ne damaĝi la periostean histon de la vertebra korpo dum kirurgio.
(A) La disko L5 -L6 estas elmontrita per posterolateral retroperitoneala aliro. (B) Uzu 16-mezurilan nadlon por bori truon proksime al la L5-finaĵo. (C) Aŭtologaj MF -oj estas rikoltitaj.
Ĝenerala anestezio estis administrita kun 20% uretano (5 ml/kg) administrita per la orela vejno, kaj lumbaj spine -radiografioj ripetiĝis je 12, 16, kaj 20 semajnoj postoperacie.
Kunikloj estis oferitaj per intramuskula injekto de ketamino (25,0 mg/kg) kaj intravena natria pentobarbital (1,2 g/kg) je 12, 16 kaj 20 semajnoj post la kirurgio. La tuta spino estis forigita por histologia analizo kaj reala analizo estis farita. Kvanta inversa transskribo (RT-QPCR) kaj okcidenta blotado estis uzataj por detekti ŝanĝojn en imunaj faktoroj.
MRI -ekzamenoj estis faritaj ĉe kunikloj uzante klinikan magneton de 3.0 T (GE Medical Systems, Florence, SC) ekipitaj per ortogona lim -bobena ricevilo. Kunikloj estis anestezitaj kun 20% uretano (5 ml/kg) per la orela vejno kaj tiam metitaj supine ene de la magneto kun la lumba regiono centrita sur cirkla surfaco de 5-cola diametro (GE Medicinaj Sistemoj). Koronaj T2-pezitaj lokalizaj bildoj (TR, 1445 ms; TE, 37 ms) estis akiritaj por difini la lokon de la lumba disko de L3-L4 ĝis L5-L6. Sagittal-ebeno T2-pezitaj tranĉaĵoj estis akiritaj per la jenaj agordoj: Rapida spino-eca sekvenco kun ripetotempo (TR) de 2200 ms kaj echoa tempo (TE) de 70 ms, matrico; vida kampo de 260 kaj ok stimuloj; La tranĉa dikeco estis 2 mm, la interspaco estis 0,2 mm.
Post kiam la lasta foto estis prenita kaj la lasta kuniklo estis mortigita, la ruza, muskolo enigita kaj NP-diskoj estis forigitaj por histologia ekzameno. Ŝtofoj estis fiksitaj en 10% neŭtrala bufrita formalino dum 1 semajno, dekalkulita kun etilendiaminetetraacetika acido, kaj parafina sekciita. Tissuaj blokoj estis enigitaj en parafinon kaj tranĉitaj en sagitajn sekciojn (5 μm dikaj) uzante mikrotomon. Sekcioj estis makulitaj kun hematoxilino kaj eosino (H&E).
Post kolektado de la intervertebraj diskoj de la kunikloj en ĉiu grupo, totala RNA estis ĉerpita uzante UNIQ-10-kolumnon (Ŝanhaja Sangon Biotechnology Co., Ltd., Ĉinio) laŭ la instrukcioj de la fabrikanto kaj ImporM II inversa transskriba sistemo (Promega Inc. , Madison, WI, Usono). Inversa transskribo estis farita.
RT-QPCR estis farita uzante Prism 7300 (Applied Biosystems Inc., Usono) kaj SYBR Green Jump Start Taq ReadyMix (Sigma-Aldrich, Sankta Luiso, MO, Usono) laŭ la instrukcioj de la fabrikanto. La PCR -reakcia volumo estis 20 µl kaj enhavis 1,5 µl da diluita cDNA kaj 0,2 μm de ĉiu printilo. Primeroj estis desegnitaj de Oligoperfect Designer (Invitrogen, Valencio, CA) kaj fabrikitaj de Nanjing Golden Stewart Biotechnology Co., Ltd. (Ĉinio) (Tabelo 1). La sekvaj termikaj biciklaj kondiĉoj estis uzataj: komenca paŝo de polimerasa aktivigo je 94 ° C dum 2 min, tiam 40 cikloj de 15 s ĉiu je 94 ° C por denaturado de ŝablono, annealing dum 1 min je 60 ° C, etendo kaj fluoreskeco. Mezuroj estis faritaj dum 1 min je 72 ° C. Ĉiuj specimenoj estis amplifitaj tri fojojn kaj la meza valoro estis uzata por RT-QPCR-analizo. Datumoj pri amplifado estis analizitaj per FlexStation 3 (Molekulaj Aparatoj, Sunnyvale, CA, Usono). IL-4, IL-17, kaj IFN-γ-gena esprimo estis normaligitaj al la endogena kontrolo (ACTB). Relativa esprimo niveloj de cela mRNA estis kalkulitaj uzante la 2-ΔδCT-metodon.
Tuta proteino estis ĉerpita el histoj uzante histan homogenigilon en RIPA -liza bufro (enhavanta protease kaj fosfatase -inhibician koktelon) kaj tiam centrifugita je 13.000 rpm dum 20 min je 4 ° C por forigi histojn. Kvindek mikrogramoj da proteino estis ŝarĝitaj per strateto, apartigitaj per 10% SDS-PAGE, kaj poste transdonitaj al PVDF-membrano. Blokado estis farita en 5% nefata seka lakto en tris-bufrita salo (TBS) enhavanta 0,1% Tween 20 dum 1 h ĉe ĉambra temperaturo. La membrano estis inkubita kun kuniklo kontraŭ-dekorina primara antikorpo (diluita 1: 200; Boster, Wuhan, Ĉinio) (diluita 1: 200; Bioss, Pekino, Ĉinio) nokte je 4 ° C kaj reagis en la duaj tagoj; kun malĉefa antikorpo (kaprina kontraŭ-kuniklo-imunoglobulino G je 1: 40,000-diluo) kombinita kun ĉevala peroksidasa (Boster, Wuhan, Ĉinio) dum 1 horo ĉe ĉambra temperaturo. Western blot-signaloj estis detektitaj per pliigita kemiluminescenco sur la kemiluminescenta membrano post radiado de radioj. Por densitometria analizo, blotoj estis skanitaj kaj kvantigitaj per BANDSCAN -programaro kaj la rezultoj estis esprimitaj kiel la rilatumo de cela gena imunoreaktiveco al tubulina imunoreaktiveco.
Statistikaj kalkuloj estis faritaj per la programaro SPSS16.0 (SPSS, Usono). Datumoj kolektitaj dum la studo estis esprimitaj kiel meznombro ± norma devio (mezumo ± SD) kaj analizita per unudirekta ripetita mezuro analizo de varianco (ANOVA) por determini diferencojn inter la du grupoj. P <0.05 estis konsiderata statistike signifa.
Tiel, la starigo de besta modelo de MC per enplantado de aŭtologaj NP -oj en la vertebran korpon kaj plenumante makroanatomian observadon, MRI -analizon, histologian taksadon kaj molekulan biologian analizon povas fariĝi grava ilo por taksi kaj kompreni la mekanismojn de homa MC kaj disvolvi novan terapian intervenoj.
Kiel citi ĉi tiun artikolon: Han, C. et al. Besto -modelo de modaj ŝanĝoj estis establita per enplantado de aŭtologa kerno pulposus en la subkondran oston de la lumba spino. Sci. Rep. 6, 35102: 10.1038/SREP35102 (2016).
Weishaupt, D., Zanetti, M., Hodler, J., kaj Boos, N. Magneta resonanca bildigo de la lumba spino: prevalenco de diska herniado kaj retenado, nerva radika kunpremo, finaj plataj anormalecoj, kaj faceta komuna osteoartrito en asimptomaj volontuloj . indico. Radiologio 209, 661–666, doi: 10.1148/radiologio.209.3.9844656 (1998).
Kjaer, P., Korsholm, L., Bendix, T., Sorensen, JS, kaj Leboeuf-Eed, K. Modaj ŝanĝoj kaj ilia rilato al klinikaj trovoj. Eŭropa Spina Revuo: Oficiala Publikigado de la Eŭropa Spina Societo, la Eŭropa Socio de Spina Deformeco, kaj la Eŭropa Socio por Cervika Spina Esploro 15, 1312–1319, DOI: 10.1007/s00586-006-0185-X (2006).
Kuisma, M., et al. Modaj ŝanĝoj en la lumbaraj vertebraj finaĵoj: prevalenco kaj asocio kun malalta malantaŭa doloro kaj ciática en mezaĝaj viraj laboristoj. Spine 32, 1116–1122, doi: 10.1097/01.BRS.0000261561.12944.FF (2007).
De Roos, A., Kressel, H., Spritzer, K., kaj Dalinka, M. MRI de osta medolo ŝanĝiĝas proksime al la fina plato en degenera malsano de la lumba spino. AJR. Usona Revuo pri Radiologio 149, 531–534, doi: 10.2214/AJR.149.3.531 (1987).
Modic, MT, Steinberg, PM, Ross, JS, Masaryk, TJ, kaj Carter, JR Degenerativa disko -malsano: Taksado de vertebraj medolo ŝanĝiĝas kun MRI. Radiologio 166, 193–199, doi: 10.1148/radiologio.166.1.3336678 (1988).
Modic, MT, Masaryk, TJ, Ross, JS, kaj Carter, JR -bildigo de degenera diska malsano. Radiologio 168, 177–186, doi: 10.1148/radiologio.168.1.3289089 (1988).
Jensen, TS, et al. Antaŭdiroj de nevertebraj finplataj (modaj) signalaj ŝanĝoj en la ĝenerala loĝantaro. Eŭropa Spina Revuo: Oficiala Publikigado de la Eŭropa Spina Societo, la Eŭropa Socio de Spina Deformeco, kaj la Eŭropa Socio por Cervika Spina Esploro, Divido 19, 129–135, DOI: 10.1007/s00586-009-1184-5 (2010).
Albert, HB kaj Mannisch, K. Modaj ŝanĝoj post lumba disko -herniado. Eŭropa Spina Revuo: Oficiala Publikigado de la Eŭropa Spina Societo, la Eŭropa Societo pri Spina Deformeco kaj la Eŭropa Socio por Esploro de Spina Spino 16, 977–982, DOI: 10.1007/s00586-007-0336-8 (2007).
Kerttula, L., Luoma, K., Vehmas, T., Gronblad, M., kaj Kaapa, E. Modic Type I-ŝanĝoj povas antaŭdiri rapide progresivan deforman diskan degeneradon: 1-jara prospekta studo. Eŭropa Spina Revuo 21, 1135–1142, doi: 10.1007/s00586-012-2147-9 (2012).
Hu, ZJ, Zhao, FD, Fang, XQ kaj Fan, SW Modic Changes: Eblaj kaŭzoj kaj kontribuo al lumba disko -degenerado. Medicinaj Hipotezoj 73, 930–932, doi: 10.1016/j.mehy.2009.06.038 (2009).
Krok, HV -interna disko -rompo. Diska Prolapsa problemoj pli ol 50 jarojn. Spino (Phila PA 1976) 11, 650–653 (1986).
Afiŝotempo: Dec-13-2024